描述:尼龍毛柱是免疫學中一種用于分離T細胞的分離柱。憂郁在研究體內(nèi)及體外的免疫系統(tǒng)時,分離淋巴細胞群是一個關(guān)鍵步驟。而市場上并沒有針對B細胞的特異性抗血清,所以分離淋巴細胞中的T細胞并不是十分方便。T細胞尼龍毛分離法利用了尼龍毛對B細胞的親和力,從而使T細胞在沒有嚴重損傷的情況下達到的足夠的純度。該方法不像流式和磁珠費用昂貴,而且操作簡便,所需要的條件也不高,是一種非常實用的方法。
尼龍毛柱是免疫學中一種用于分離T細胞的分離柱。憂郁在研究體內(nèi)及體外的免疫系統(tǒng)時,分離淋巴細胞群是一個關(guān)鍵步驟。而市場上并沒有針對B細胞的特異性抗血清,所以分離淋巴細胞中的T細胞并不是十分方便。T細胞尼龍毛分離法利用了尼龍毛對B細胞的親和力,從而使T細胞在沒有嚴重損傷的情況下達到的足夠的純度。該方法不像流式和磁珠費用昂貴,而且操作簡便,所需要的條件也不高,是一種非常實用的方法。
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21759-1 | Nylon Wool Fiber, Sterile | 3400 | 1 pkg | polysiences | |
18369-50 | Nylon Wool Fiber | 3145 | 50g | polysiences | |
18369-10 | Nylon Wool Fiber | 1054 | 10g | polysiences |
操作方法:
1.秤取1.5g尼龍毛裝入20-30ml玻璃容器或注射器內(nèi),填料的體積控制在15毫升左右。因為尼龍毛的松緊關(guān)系到T細胞的回收率,所以要特別注意。注射器下端配接5厘米左右長的帶有彈簧夾的橡皮管。
2. 加入大量的PBS平衡柱子后,用鋁箔包裹,并置于適當?shù)娜萜鲀?nèi),高壓滅菌15分鐘。
?。ㄉ唐坊猃埫陨喜襟E可以省略,經(jīng)過PBS平衡后可以直接進行下列步驟。)
3. 滅菌的尼龍毛柱垂直固定后放于超凈臺內(nèi),頂部以鋁箔覆蓋,避免污染。
4. 注射器下端,橡皮管,彈簧夾用*消毒。打開彈簧夾調(diào)節(jié)流速在大約3-4ml/min。
5.首先,加入3-4倍柱體的無血培養(yǎng)基平衡,之后加入相同體積的含有血清的培養(yǎng)基平衡(上述培養(yǎng)基都要預熱),zui后等培養(yǎng)基液面接近柱填料液面時,關(guān)閉彈簧夾。
6. 樣本細胞懸浮液濃度控制在約5×108cells/ml,上樣量一般是1/3-1/5柱體積。樣品加入之后,再加入少量培養(yǎng)液,然后關(guān)閉彈簧夾。
7.覆蓋鋁箔,垂直固定,置于消毒過的容器中,于培養(yǎng)箱內(nèi)37℃孵育1小時。此過程中柱子必須要保持垂直狀態(tài)。
8. 從培養(yǎng)箱中拿出柱子,置于超凈臺內(nèi),除去鋁箔。接上按照4.中的方法消毒的彈簧夾和橡皮管,加入適當體積經(jīng)37℃預熱的培養(yǎng)基,打開彈簧夾控制流速在3-4 mL/min,流出約5ml之后,流出的培養(yǎng)液基變得不透明,此時其中含有T細胞,收集這一部分培養(yǎng)基。
9. 基本上何時結(jié)束收集取決于流出液體中細胞的濃度,實際上,收集的量達到一個柱體積時就可以停止收集,因為即使收集更多的量,回收率幾乎不會增加。
10.上述操作后,細胞的
回收率為: 15~20 %
T細胞含量: 85~95 %
B細胞污染率: 1 5 %
多數(shù)細胞被確定為T細胞。
?。ㄗⅲ┦占掣接谀猃埫系募毎麜r,將T細胞收集完畢后的尼龍毛再無菌操作的狀態(tài)下取出,轉(zhuǎn)移到適當?shù)娜萜髦?,用鑷子小心的將尼龍毛松開,粘附的細胞可以洗到培養(yǎng)基中?;蛘邔⒆⑸淦餍静迦胱⑸淦鲀?nèi),通過壓力使的粘附的細胞隨著液體流出。