描述:蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類(lèi)的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。從林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中純化得到。
蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類(lèi)的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。從林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中純化得到。據(jù)資料顯示:該酶有兩個(gè)ca2+結(jié)合位點(diǎn),它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機(jī)理并無(wú)直接關(guān)系。然而,如果從該酶中除去ca2+,由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以,蛋白酶k消化過(guò)程中通常加入edta(以抑制依賴(lài)于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對(duì)蛋白酶k具有較強(qiáng)耐性的蛋白,如角蛋白一類(lèi),則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGTA(ph8.0)至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+。
蛋白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,因而它應(yīng)用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體DNA,蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH 4-12.5)均有活性。
推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。
蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn):20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinase K):將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
值得注意的是,蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì),提高雜交信號(hào).但蛋白酶K的濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高時(shí),都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問(wèn)題,并能達(dá)到理想的染色效果.
保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融,有效保證12月。
孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。
蛋白酶K已廣泛應(yīng)用在皮革、毛皮、絲綢、醫(yī)藥、食品、釀造等方面。皮革工業(yè)的脫毛和軟化已大量利用蛋白酶,既節(jié)省時(shí)間,又改善勞動(dòng)衛(wèi)生條件。蛋白酶還可用于蠶絲脫膠、肉類(lèi)嫩化、酒類(lèi)澄清。臨床上可作藥用,如用胃蛋白酶治療消化不良,用酸性蛋白酶治療支氣管炎,用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶對(duì)外科化膿性創(chuàng)口的凈化及胸腔間漿膜粘連的治療。加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產(chǎn)品,含堿性蛋白酶,能去除衣物上的血漬和蛋白污物,但使用時(shí)注意不要接觸皮膚,以免損傷皮膚表面的蛋白質(zhì),引起皮疹、濕疹等過(guò)敏現(xiàn)象。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
貨號(hào): GPE-2009001
批號(hào): 201003008
規(guī)格: 每個(gè)獨(dú)立包裝中含有100毫克的蛋白酶K凍干粉
比活性值: 40 U/mg蛋白,17.5 U/mg干粉
來(lái)源種屬: 林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)
相對(duì)分子質(zhì)量:29,730
貯存條件:
干粉狀態(tài)可在2~4oC條件下低溫保藏。使用時(shí),建議將每個(gè)獨(dú)立包裝的干粉全部溶解,分裝為適當(dāng)體積后,-20oC貯存。
正確的貯存條件下,干粉狀態(tài)的有效期可達(dá)一年。液體狀態(tài)的有效期為半年。打開(kāi)包裝使用后,如果在2~8oC環(huán)境下放置超過(guò)一周時(shí)間,建議過(guò)濾除菌后再用于實(shí)驗(yàn)。
貯存緩沖液:20 mM Tris-HCl (pH 7.4),1 mM氯化鈣,50%甘油(稀釋用緩沖液不含甘油)。
質(zhì)量控制:
活性單位定義
37oC、pH 7.5條件下,每分鐘可水解底物酪蛋白生成1 μmol酪氨酸的蛋白酶K 的量,定義為一個(gè)單位(U)。
脫氧核糖核酸酶殘留
以λ DNA為底物,37oC消化6小時(shí)以上,未檢測(cè)到脫氧核糖核酸酶活性。
核糖核酸酶殘留
25oC消化16小時(shí)以上,未檢測(cè)到核糖核酸酶活性。
產(chǎn)品用途:
蛋白酶K是一種用途廣泛的非特異性的絲氨酸蛋白酶。在pH 4到pH 12的條件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在時(shí)亦很穩(wěn)定。常用于提取mRNA、基因組DNA,或用于從各種細(xì)胞中提純DNA和RNA時(shí)消化雜蛋白。還可用于糖蛋白的修飾,以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究等方面。
訂貨信息:
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 純度 | 活性單位 | 單價(jià)(元/100mg) | 品牌 |
3508838103 | 蛋白酶K | 100mg | ≧95% | ≧35U/mg | RMB:300 | ROCHE |
1.24568.0100 | 蛋白酶K | 100mg | ≧95% | ≧35U/mg | RMB:300 | MERCK |